Sintesis y caracterizacion de 2-c-metilnucleosidos en aplicaciones de silenciamiento genico [recurso electronico] / Rodrigo Martin Pontiggia ; director: Adolfo Iribarren, Adolfo.

Format:

Book

Thesis/Dissertation

Author/Creator:

Pontiggia, Rodrigo Martin.

Contributor:

Iribarren, Adolfo, dir.

Language:

Spanish

Subjects (All):

Quimica.

Quimica biologica.

Chemistry.

Biochemistry.

Local Subjects:

Quimica.

Quimica biologica.

Place of Publication:

Buenos Aires, Argentina : Universidad de Buenos Aires, 2009.

Summary:

El presente trabajo se enmarca dentro del campo de los oligonucleotidos, mas especificamente los empleados como silenciadores genicos. El uso de acidos nucleicos en terapia antisentido posee dos limitaciones generales, su baja estabilidad en fluidos biologicos y su pobre biodistribucion. Estos problemas pueden ser abordados mediante el uso de modificaciones quimicas de los mismos. Segun trabajos previos de nuestro laboratorio los 2'-C-metilnucleosidos (2CMNs) producen un aumento de la vida media de ribozimas cabeza de martillo cuando son incorporados en zonas simple cadena manteniendo niveles de actividad in vitro aceptables. En este contexto, el principal objetivo de este trabajo fue realizar la caracterizacion de los 2CMNs realizando ensayos en celulas con la ribozima cabeza de martillo modificada y estudiar la posible utilizacion de los 2CMN en aplicaciones doble cadena como siRNA. El primer paso consistio en el diseno de una ruta sintetica que permitiera obtener los 2CMNs en forma eficiente y utilizando reactivos mas economicos que los empleados en otras estrategias. Para poder preparar los oligonucleotidos a partir de los nucleosidos obtenidos fue necesario resolver problemas asociados a la proteccion de la posicion 2'. Una vez realizado esto, se logro incorporar los 2CMN en oligonucleotidos de 12 monomeros de longitud para el estudio de las propiedades de hibrizacion y potencial uso en siRNA. Ademas, estas estructuras fueron modeladas y utilizadas en un estudio computacional que permitio conocer en detalle el impacto de la introduccion de los 2CMN en una helice doble cadena, justificando los resultados experimentales obtenidos. Para cumplir con el objetivo principal del trabajo, se disenaron y sintetizaron ribozimas cabeza de martillo para reducir los niveles de expresion del receptor de estrogeno en celulas de cancer de mamas, pudiendo cuantificar la relacion actividad/resistencia en un contexto celular. La ribozima con 2'-C-metiluridina presento mayores niveles de actividad que la no modificada, llegandose a observar el efecto en los niveles de receptor hasta 36 hs despues de la transfeccion.

Notes:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.

OCLC:

951192642